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DiO细胞膜绿色荧光染色试剂盒

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￥420

产品特点: 细胞膜染色更加快速、荧光更加明亮稳定、效果更好。

货号： KSG1704

规格：

100-1000 T （DiO绿色） 100-1000 T （DiI红色）

产品描述

产品信息

产品名称	产品编号	规格
DiO细胞膜绿色荧光染色试剂盒	KSG1704	100-1000T

产品简介

DiO，又称DiOC₁₈(3)，中文全称3-十八烷基-2-[3-(3-十八烷基-2(3H)-苯并恶唑-2-亚基)-1-丙烯-1-基]苯并恶唑高氯酸盐，分子量881.72，是一类具有亲脂性的长链二烷基碳菁类染料荧光染料，常用于标记细胞膜以及其他脂溶性生物结构。DiO进入细胞膜后可以侧向扩散，逐渐使整个细胞膜被染色。DiO在进入细胞膜之前荧光非常弱，当与细胞结合后荧光强度会大大增强，被激发后可以发出绿色荧光，并可以用标准的FITC滤光片检测。DiO最大激发波长484nm，最大发射波长501nm。根据DiO的特性，其可以用于活细胞以及固定细胞的染色。此外DiO探针一般不影响细胞的生存能力，故可正向或逆向的标记细胞或某些物质（外泌体）用作示踪检测。

本产品DiO细胞膜绿色荧光染色试剂盒，包含DiO荧光探针及优化的染色缓冲液，使细胞膜染色更加快速、荧光更加明亮稳定、效果更好。

储存与运输

干冰运输；-20℃避光保存，探针避免反复冻融，有效期至少6个月。

组成

Component Number	Component	KSG1704
KSG1704-1	DiO细胞膜绿色荧光探针	400 μL
KSG1704-2	染色缓冲液	100 mL
说明书		1份

操作步骤

1. DiO染色工作液配制：

1.1. 将DiO细胞膜绿色荧光探针与染色缓冲液以1:250比例混合稀释，配制成DiO染色工作液（现配现用）。注意：DiO探针母液浓度为2.5 mM，其稀释比可根据具体情况在1:250-1:500进行调整，以获得最佳染色效果。

2. 悬浮活细胞染色：

2.1. 收集悬浮细胞，以500-1000 g室温离心3-5 min，去除细胞上清。

2.2. 使用DiO染色工作液重悬细胞，使细胞密度在1-2×10⁶个/mL。

2.3. 置于37℃避光孵育5-20 min，建议根据具体细胞调整染色时间，以获得最佳染色效果。

2.4. 孵育结束后，500-1000 g室温离心3-5 min，吸除DiO染色工作液。

2.5. 用37℃预热的PBS或细胞培养基重悬细胞，500-1000 g离心3-5 min，去除上清。

2.6. 重复2.5步骤一次。

2.7. 流式细胞仪上机检测，或将细胞转移至多孔板、细胞培养皿或者载玻片上，在荧光显微镜下观察。DiO最大激发波长484 nm，最大发射波长501 nm。

3. 贴壁活细胞染色（6孔板为例）：

3.1. 将细胞提前以一定密度种植于6孔板中。

3.2. 吸除细胞培养基，用PBS（KSG4202）洗涤细胞2次。加入1 mL DiO染色工作液（其他规格孔板，视情况调整，保证染料覆盖细胞）。

3.3. 置于37℃避光孵育5-20 min，吸除DiO染色工作液。建议根据具体细胞调整染色时间，以获得最佳染色效果。

3.4. 用37℃预热的PBS或细胞培养基，洗涤细胞1-2次。

3.5. 加入37℃预热的PBS或细胞培养基，荧光显微镜下观察。DiO最大激发波长484nm，最大发射波长501nm。

4. 固定的贴壁细胞染色：

4.1. 样本前处理：

对于细胞：去除细胞培养基，PBS洗涤1-2次。加入4%多聚甲醛固定液（KSG1101），室温固定10 min。吸除固定液，用PBS洗涤2-3次。

4.2. 加入0.1-0.5% Triton-100（PBS配制）处理细胞，室温通透10 min；吸除通透液，用PBS洗涤2-3次。

4.3. （可选，免疫荧光标记）按照免疫荧光染色的方法进行抗体的孵育或其他染料进行染色。注意。抗体孵育过程中的封闭液、抗体稀释液、洗涤液等不能含有去垢剂。

4.4. 加入适量体积的DiO染色工作液覆盖细胞，37℃避光孵育5-20 min，吸除DiO染色工作液。建议根据具体细胞样本调整染色时间，以获得最佳染色效果。

4.5. 细胞经PBS洗涤2-3次，然后置于荧光显微镜观察（细胞需以适量PBS覆盖）。DiO最大激发波长484 nm，最大发射波长501 nm。

5. 外泌体荧光标记：

5.1. 取至少1×10⁹颗粒数外泌体（约50-100 μg蛋白量），加入1 mLPBS或染色缓冲液重悬。

5.2. 将DiO细胞膜绿色荧光探针与染色缓冲液以1：25比例混合稀释，配制成10×DiO染色液（现配现用），与外泌体溶液1：10混合，将样品置于37℃避光孵育30 min。

5.3. 用10倍体积PBS稀释样品体积（可选）。

5.4. 按照超速离心或者尺寸排阻法，再一次提取外泌体，以去除多余的染料。

5.5. 收集的外泌体沉淀，用PBS重悬，得到DiO标记的外泌体。可用于相应的后续实验，如细胞摄取。

注意事项

1. 荧光染料均存在淬灭问题，请注意避光以减缓荧光猝灭。

2. 探针亲脂性的特点，实验过程中请避免使用含有甘油或其它有机物的试剂，否则会影响染色效果。

3. 当需要固定操作时，样品宜在4%多聚甲醛中进行固定，其他不适当的固定液会导致荧光背景高。

4. 由于细胞间敏感性和实验目的的不同，探针的最佳稀释比和最佳孵育时间需根据实际情况适当调整。

5. 为了您的健康和安全，操作时请穿好实验服、戴好手套。

本产品仅供科研用途，不用于临床诊断！

货号	名称	目标物	EX/EM	活细胞染色	染色后固定	染色后破膜	染色前固定	染色前破膜	荧光酶标仪	荧光显微镜	流式细胞仪
KSG1127-1ML	Hoechst 33342染色液（1 mg/mL）	细胞核	350/461 nm	是	是	是	是	是		√	√
KSG1011-10ML	Hoechst 33258染液（即用型）	细胞核	350/461 nm	否	否	否	是	是		√	√
KSG1012-10ML	DAPI染色试剂（即用型）	细胞核	350/461 nm	否	否	否	是	是		√	√
KSG1012-100ML	DAPI染色试剂（即用型）	细胞核	350/461 nm	否	否	否	是	是		√	√
KSG1021-10ML	PI染液	细胞核	535/615 nm	否	否	否	是	是	√	√	√
KSG1248-100T	iF488-鬼笔环肽	细胞骨架	493/517 nm	否	否	否	必需固定	是		√
KSG1249-100T	iF555-鬼笔环肽	细胞骨架	556/574 nm	否	否	否	必需固定	是		√
KSG1515-100T	JC-1线粒体膜电位检测试剂盒	线粒体	585/590；514.529 525/590；488/525	是	否	否	不能固定	否	√	√	√
KSG1743-100T	JC-10线粒体膜电位检测试剂盒	线粒体	490/525 nm and 540/590 nm	是	否	否	否	否	√	√	√
KSG1704	DiO细胞膜绿色荧光染色试剂盒	细胞膜	484/501 nm	是	是	是	是	是		√
KSG1705	DiI细胞膜红色荧光染色试剂盒	细胞膜	549/565 nm	是	是	是	是	是		√
KSG1742-100T	DiD细胞膜荧光染色试剂盒（洋红色）	细胞膜	644/665 nm	是	是	是	是	是		√
KSG1720-20UL	ER-Tracker Green（内质网绿色荧光探针）	内质网	504/511 nm	是	是	否	否	否		√
KSG1721-20UL	ER-Tracker Red（内质网红色荧光探针）	内质网	587/615 nm	是	是	否	否	否		√
KSG1722-50UL	Lyso-Tracker Green（溶酶体绿色荧光探针）	溶酶体	504/511nm	是	否	否	否	否		√
KSG1741-50UL	Lyso-Tracker Red（溶酶体红色荧光探针）	溶酶体	577/590nm	是	否	否	否	否		√
KSG1723-50UG	线粒体红色荧光探针	线粒体	578±3/599±4 nm	是	是（甲醛）	是	否	否		√
KSG1740-50UG	线粒体绿色荧光探针	线粒体	490/516nm	是	是（戊二醛）	是(皂苷)	是（甲醛）	是(皂苷)		√
KSG1728-0.1ML	Calcein AM（钙黄绿素AM）	细胞内	494/517 nm	是	是	否	不能固定	否	√	√	√
KSG1730-100UL	iF488-Wheat Germ Agglutinin（WGA，绿光）	细胞膜	493/517 nm	是	是	是	是	不可		√
KSG1731-100UL	iF555-Wheat Germ Agglutinin（WGA，红光）	细胞膜	556/574 nm	是	是	是	是	不可		√
KSG1905-100T	荧光法脂滴检测试剂盒	脂滴	493/503 nm	是	是	是	是	不可	√	√	√
KSG1616-2000T	CFDA SE细胞增殖与示踪检测试剂盒	细胞	495/519 nm	是	是	否	否	否	√	√	√
KSG1706-100T	活性氧(ROS)检测试剂盒	细胞	488/525nm	是	否	否	否	否	√	√	√
KSG1725-100T	MQAE荧光法氯离子检测试剂盒	细胞	319/462 nm	是	否	否	否	否	√	√	√
KSG1904-100T	Dihydroethidium (超氧化物阴离子荧光探针)	细胞	520/605nm	是	否	否	否	否	√	√	√
KSG1724-100T	Fluo-4 AM荧光法钙离子检测试剂盒	细胞	494/528 nm	是	否	否	否	否	√	√	√
KSG1726-100T	BCECF, AM荧光法pH检测试剂盒	细胞	488/525nm	是	否	否	否	否	√	√
KSG1727-100T	FerroOrange荧光法亚铁离子检测试剂盒	细胞	543 nm/580 nm	是	否	否	否	否	√	√	√
KSG1744-200UL	葡萄糖摄取检测试剂盒（2-否BDG荧光法）	细胞	488/525nm	是	否	否	否	否	√	√	√
KSG1746-100T	组织活性氧（ROS)检测试剂盒(DHE荧光法）	细胞	520/605nm	是	否	否	否	否	√	√（细胞）	√（细胞）
KSG1745-20T	外泌体标记与示踪试剂盒（PKH 26荧光法）	细胞	556/567nm	是	否	否	否	否		√	√
KSG1749-100T	细胞自噬检测试剂盒（MDC活细胞荧光法）	细胞	335/512nm	是	否	否	否	否		√
KSG1747-100T	线粒体通透性转换孔（MPTP）检测试剂盒	细胞	454/571nm	是	否	否	否	否	√	√	√
KSG1748-200T	线粒体钙离子检测试剂盒（Rhod-2 AM荧光法）	细胞	552/581nm	是	否	否	否	否	√	√	√

（产品包装升级中，以实物为准。）

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