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活性氧(ROS)检测试剂盒

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￥330

产品特点: 快速有效的对细胞内活性氧进行检测灵敏度高，使用方便

货号： KSG1706-100T

规格：

100 T

产品描述

产品信息

产品名称	产品编号	规格
活性氧(ROS)检测试剂盒	KSG1706-100T	100T

产品描述

活性氧(ROS)检测试剂盒，也称Reactive Oxygen Species Assay Kit或ROS Assay Kit，是一种基于荧光探针DCFH-DA进行活性氧检测的试剂盒。DCFH-DA，中文全称2',7'-二氯荧光素二乙酸酯，分子量487.29，DCFH-DA本身不具有荧光性，可以自由穿过细胞膜。进入细胞后可以被细胞内广泛存在的酯酶水解生成DCFH。DCFH不具有细胞膜通透性，从而被阻滞在细胞内。无荧光性的DCFH可被细胞内的活性氧ROS氧化生成有荧光的DCF，产生的荧光信号强度与细胞内ROS水平成正比。通过荧光显微镜、流式细胞仪或激光共聚焦显微镜等检测荧光信号，因此可以间接评判细胞内活性氧水平。

本产品活性氧(ROS)检测试剂盒即基于此原理基础快速有效的对细胞内活性氧进行检测灵敏度高，使用方便。同时提供ROS阳性诱导试剂，能够在较短时间诱导多类细胞内ROS水平，以提供阳性样本。以6孔板每孔加样量为标准计算，本试剂盒可测定约100次。

储存与运输

冰袋运输；-20℃避光保存，12个月有效。

试剂盒组成

Component Number	Component	KSG1706-100T
KSG1706-1	DCFH-DA探针	100 μL
KSG1706-2	活性氧阳性诱导剂（2×）	20 mL
产品说明书		1 份

操作步骤

1. 实验前准备：

1.1. DCFH-DA工作液配制：将DCFH-DA探针以1:1000比例，用不含血清的细胞培养基或Earle’s平衡盐溶液（KSG4213）稀释，配制成DCFH-DA工作液。

1.2. （可选）活性氧阳性诱导剂工作液配制：将活性氧阳性诱导剂（2×）与不含血清的细胞培养基或Earle’s平衡盐溶液（KSG4213）1:1体积混合稀释，配制成1×活性氧阳性诱导剂工作液。

2. （可选）阳性对照组细胞准备：

2.1. 取状态良好的贴壁去除原培养基，悬浮细胞通过离心去除培养基。

2.2. 加入1×活性氧阳性诱导剂工作液覆盖贴壁细胞或重悬悬浮细胞，置于37℃ CO₂培养箱中避光孵育45 min（不同细胞敏感性不同，如果在刺激45 min后观察不到活性氧的升高，可适当延长诱导时间或提高诱导剂浓度，如果活性氧升高得过快，可适当减少诱导时间或降低诱导剂浓度）。

3. 贴壁细胞活性氧检测：

3.1. 细胞种板：至少提前1日将状态良好的细胞按一定密度均匀接种于孔板中，并根据实验需要对其进行药物或者其他前处理（接种密度由细胞的大小、生长速度等因素决定，保证检测时细胞汇合度在50-70%）。

3.2. 细胞洗涤：吸除细胞培养基，用PBS缓冲液（KSG4202）洗涤1-2次，减少血清、药物等物质对实验结果的干扰：

3.3. 装载探针：吸除洗涤缓冲液，参考下表加入对应体积的DCFH-DA工作液，置于37℃ CO₂培养箱中避光孵育30 min。然后吸除DCFH-DA工作液，用PBS缓冲液洗涤2-3次，以充分去除多余的探针，最后用PBS覆盖细胞。

细胞培养板	6-well	12-well	24-well	48-well	96-well
活性氧检测工作液/孔	1000 μL	500 μL	250 μL	200 μL	100 μL

3.4. ROS检测：孔板内标记好的细胞直接置于荧光显微镜或共聚焦显微镜观察。或消化后收集细胞用荧光分光光度计、酶标仪、流式细胞仪等仪器的检测。使用488nm激发波长，525nm发射波长，DCF的荧光光谱和FITC非常相似，可以用FITC的参数设置检测DCF。

4. 悬浮细胞活性氧检测（也适用于前处理后消化重悬的贴壁细胞）：

4.1. 细胞前处理：根据实验需求，选取状态良好的细胞，根据实验需要对其进行药物或者其他前处理后，1000 rpm离心3-5 min收集细胞（细胞密度需根据后续检测体系、方法以及总量决定，如：流式检测单份细胞数量不少于10⁴）。

4.2. 细胞洗涤：用PBS缓冲液洗涤1-2次，1000 rpm离心3-5 min去除上清收集细胞。

4.3. 装载探针：加入一定体积的DCFH-DA工作液，使细胞密度为1X10⁵-5X10⁵个/mL，置于37℃ CO₂培养箱中避光孵育30 min。期间每5 min轻轻晃动混匀，以确保探针和细胞充分接触。孵育结束后，1000 rpm离心3-5 min，去除DCFH-DA工作液，并用PBS缓冲液洗涤2-3次，以充分去除多余的探针。最后用PBS重悬细胞。

4.4. ROS检测：探针标记过的细胞可直接用荧光分光光度计、酶标仪、流式细胞仪等检测。也可以滴到载玻片上，用荧光显微镜或共聚焦显微镜等仪器观察。使用488nm激发波长，525nm发射波长，DCF的荧光光谱和FITC非常相似，可以用FITC的参数设置检测DCF。

注意事项

1. 实验过程中如果探针标记后整体荧光强度过高或过低，可以适当调整DCFH-DA探针的稀释倍数以及孵育时间。

2. 未进入细胞的探针，会导致较高的背景，请尽量洗净。

3. 探针反复冻融，染色效率会降低，建议分装后避光保存，避免反复冻融。

4. 活性氧阳性诱导剂（2×），为浓缩溶液，低温储存时可能会出现沉淀析出，可经37℃水浴加热促进溶解，不影响使用。

5. 活性氧阳性诱导剂（2×），主要是用于阳性对照组样品的诱导，根据实验需要选择是否做阳性对照。

6. 细胞每次离心对总细胞密度会有一定损耗，请注意控制初始细胞量，以防最后细胞量不够检测的现象。

7. 由于荧光探针存在猝灭的情况，请尽量缩短探针孵育后到检测所用的时间（刺激时间除外）。

8. 为了您的健康和安全，操作时请穿好实验服、戴好手套。

本产品仅供科研用途，不用于临床诊断！

货号	名称	目标物	EX/EM	活细胞染色	染色后固定	染色后破膜	染色前固定	染色前破膜	荧光酶标仪	荧光显微镜	流式细胞仪
KSG1127-1ML	Hoechst 33342染色液（1 mg/mL）	细胞核	350/461 nm	是	是	是	是	是		√	√
KSG1011-10ML	Hoechst 33258染液（即用型）	细胞核	350/461 nm	否	否	否	是	是		√	√
KSG1012-10ML	DAPI染色试剂（即用型）	细胞核	350/461 nm	否	否	否	是	是		√	√
KSG1012-100ML	DAPI染色试剂（即用型）	细胞核	350/461 nm	否	否	否	是	是		√	√
KSG1021-10ML	PI染液	细胞核	535/615 nm	否	否	否	是	是	√	√	√
KSG1248-100T	iF488-鬼笔环肽	细胞骨架	493/517 nm	否	否	否	必需固定	是		√
KSG1249-100T	iF555-鬼笔环肽	细胞骨架	556/574 nm	否	否	否	必需固定	是		√
KSG1515-100T	JC-1线粒体膜电位检测试剂盒	线粒体	585/590；514.529 525/590；488/525	是	否	否	不能固定	否	√	√	√
KSG1743-100T	JC-10线粒体膜电位检测试剂盒	线粒体	490/525 nm and 540/590 nm	是	否	否	否	否	√	√	√
KSG1704	DiO细胞膜绿色荧光染色试剂盒	细胞膜	484/501 nm	是	是	是	是	是		√
KSG1705	DiI细胞膜红色荧光染色试剂盒	细胞膜	549/565 nm	是	是	是	是	是		√
KSG1742-100T	DiD细胞膜荧光染色试剂盒（洋红色）	细胞膜	644/665 nm	是	是	是	是	是		√
KSG1720-20UL	ER-Tracker Green（内质网绿色荧光探针）	内质网	504/511 nm	是	是	否	否	否		√
KSG1721-20UL	ER-Tracker Red（内质网红色荧光探针）	内质网	587/615 nm	是	是	否	否	否		√
KSG1722-50UL	Lyso-Tracker Green（溶酶体绿色荧光探针）	溶酶体	504/511nm	是	否	否	否	否		√
KSG1741-50UL	Lyso-Tracker Red（溶酶体红色荧光探针）	溶酶体	577/590nm	是	否	否	否	否		√
KSG1723-50UG	线粒体红色荧光探针	线粒体	578±3/599±4 nm	是	是（甲醛）	是	否	否		√
KSG1740-50UG	线粒体绿色荧光探针	线粒体	490/516nm	是	是（戊二醛）	是(皂苷)	是（甲醛）	是(皂苷)		√
KSG1728-0.1ML	Calcein AM（钙黄绿素AM）	细胞内	494/517 nm	是	是	否	不能固定	否	√	√	√
KSG1730-100UL	iF488-Wheat Germ Agglutinin（WGA，绿光）	细胞膜	493/517 nm	是	是	是	是	不可		√
KSG1731-100UL	iF555-Wheat Germ Agglutinin（WGA，红光）	细胞膜	556/574 nm	是	是	是	是	不可		√
KSG1905-100T	荧光法脂滴检测试剂盒	脂滴	493/503 nm	是	是	是	是	不可	√	√	√
KSG1616-2000T	CFDA SE细胞增殖与示踪检测试剂盒	细胞	495/519 nm	是	是	否	否	否	√	√	√
KSG1706-100T	活性氧(ROS)检测试剂盒	细胞	488/525nm	是	否	否	否	否	√	√	√
KSG1725-100T	MQAE荧光法氯离子检测试剂盒	细胞	319/462 nm	是	否	否	否	否	√	√	√
KSG1904-100T	Dihydroethidium (超氧化物阴离子荧光探针)	细胞	520/605nm	是	否	否	否	否	√	√	√
KSG1724-100T	Fluo-4 AM荧光法钙离子检测试剂盒	细胞	494/528 nm	是	否	否	否	否	√	√	√
KSG1726-100T	BCECF, AM荧光法pH检测试剂盒	细胞	488/525nm	是	否	否	否	否	√	√
KSG1727-100T	FerroOrange荧光法亚铁离子检测试剂盒	细胞	543 nm/580 nm	是	否	否	否	否	√	√	√
KSG1744-200UL	葡萄糖摄取检测试剂盒（2-否BDG荧光法）	细胞	488/525nm	是	否	否	否	否	√	√	√
KSG1746-100T	组织活性氧（ROS)检测试剂盒(DHE荧光法）	细胞	520/605nm	是	否	否	否	否	√	√（细胞）	√（细胞）
KSG1745-20T	外泌体标记与示踪试剂盒（PKH 26荧光法）	细胞	556/567nm	是	否	否	否	否		√	√
KSG1749-100T	细胞自噬检测试剂盒（MDC活细胞荧光法）	细胞	335/512nm	是	否	否	否	否		√
KSG1747-100T	线粒体通透性转换孔（MPTP）检测试剂盒	细胞	454/571nm	是	否	否	否	否	√	√	√
KSG1748-200T	线粒体钙离子检测试剂盒（Rhod-2 AM荧光法）	细胞	552/581nm	是	否	否	否	否	√	√	√

（产品包装升级中，以实物为准。）

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