400-6027-270
无内毒素质粒DNA大提试剂盒
￥990
产品特点:
可从100-200 mL菌液提取500-1800 μg高纯度质粒DNA，并有效去除内毒素
货号：
KSG3645-10T
规格：
产品信息
产品名称 |
产品编号 |
规格 |
无内毒素质粒DNA大提试剂盒 |
KSG3645-10T |
10T |
产品简介
本试剂盒适用于从培养的细菌中提取各种无内毒素的质粒DNA。试剂盒采用独特的硅胶膜吸附技术以及搭配去内毒素溶液Buffer ER和Buffer ED，可得到浓度在500-1800 μg的高纯度质粒DNA，并有效地去除内毒素。使用本试剂盒提取的质粒DNA可应用于酶切反应、连接反应、PCR扩增、测序、转化、转染多种细胞等生物学实验。
储存与运输
RNase A冰袋（wet ice）运输，-20℃保存；其余试剂室温运输，室温储存；有效期12个月。
组成
Component Number |
Component |
KSG3645-10T |
KSG3645-1 |
Buffer BL |
30 mL |
KSG3645-2 |
Buffer P1 |
100 mL（使用前加入RNase A） |
KSG3645-3 |
Buffer P2 |
100 mL |
KSG3645-4 |
Buffer P3 |
100 mL |
KSG3645-5 |
RNase A |
200 μL |
KSG3645-6 |
Buffer ER |
30 mL |
KSG3645-7 |
Buffer ED |
120 mL |
KSG3645-8 |
Buffer PW |
70 mL（使用前加入163 mL无水乙醇） |
KSG3645-9 |
Buffer TE |
30 mL |
KSG3645-10 |
Column Filters |
10个 |
KSG3645-11 |
HiBind DNA Columns |
10个 |
KSG3645-12 |
50 mL Collection Tubes |
10个 |
说明书 |
1份 | |
使用前准备
1. 自备无水乙醇和50 mL Nuclease-free的离心管。
2. 使用前先将RNase A全部加入Buffer P1中，并于4℃可保存6个月。
3. Buffer PW使用前加入163 mL的无水乙醇。
4. Buffer P2如出现沉淀，请于37℃水浴中加热几分钟即可恢复澄清，使用后应立即盖紧盖子，避免试剂长时间与空气接触。
5. Buffer P3使用前请于4℃预冷。
实验步骤
1. 柱平衡步骤：向HiBind DNA Column中（HiBind DNA Column提前放入50 mL Collection Tube中）加入2.5 mL Buffer BL，8000 rpm（～8228×g）室温离心2 min，弃掉废液，将HiBind DNA Column重新放回Collection Tube中（处理过的柱子最好立即使用）；
2. 取100 mL过夜培养菌液（对于低拷贝质粒建议取200 mL过夜培养菌液），8000 rpm（～8228×g）室温离心3 min收集菌体于50 mL离心管中（尽量将上清全部去除）；
3. 加入8 mL Buffer P1（请先检查是否加入RNase A），使用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮菌体（务必使菌体彻底分散，否则会影响裂解，导致提取质粒的质量和纯度偏低）；
4. 加入8 mL Buffer P2立即温和的上下颠倒8-10次使菌体充分裂解（此步不可剧烈震荡，并且应保证在5 min以内完成），此时溶液应变得清亮粘稠，如果未变得清亮可能是菌体过多，再重新颠倒几次直到溶液透明；
5. 加入8 mL Buffer P3（提前4℃预冷）立即温和的上下颠倒10-12次，溶液出现紧实凝集块，冰上放置5 min，8000 rpm（～8228×g）4℃离心15 min，将上清慢慢地全部倒入Column Filter中，推动推柄过滤，滤液收集于Nuclease-free的50 mL离心管（自备）中；
6. 加入2.4 mL Buffer ER，颠倒混匀后冰上放置10 min（期间颠倒混匀3-5次），溶液呈透明蓝色；
7. 加入0.5倍上述溶液体积的无水乙醇，上下颠倒混匀后转移到HiBind DNA Column中（每次加入液体量不超过10 mL）；
8. 室温8000 rpm（～8228×g）室温离心2 min，弃掉HiBind DNA Column中的废液，将HiBind DNA Column重新放回Collection Tube中（第七步的溶液可进行多次过柱）；
9. 向吸附柱中加入10 mL Buffer ED 8000 rpm（～8228×g）室温离心2 min，弃掉HiBind DNA Column中的废液，将HiBind DNA Column重新放回Collection Tube中；
10. 向HiBind DNA Column中加入10 mL Buffer PW 8000 rpm（～8228×g）室温离心2 min，弃掉收集管中的废液，将HiBind DNA Column重新放回Collection Tube中；
11. 重复操作步骤10；
12. 8000 rpm（～8228×g）室温离心5 min；
13. 将HiBind DNA Column置于新的50 mL Collection Tube中，开盖室温放置10 min，向吸附膜的中间部位悬空滴加1-2 mL Buffer TE，室温放置5 min，8000 rpm（～8228×g）离心5 min。如果需要增加质粒的回收效率，可将得到的溶液重新加入到HiBind DNA Column中，室温放置5 min后，8000 rpm（～8228×g）离心5 min；
14. 将50 mL Collection Tube中的洗脱液全部移到一个Nuclease-free的1.5 mL离心管中，－20℃保存。
注意事项
1. 操作之前，请务必认真阅读本产品说明书。
2. 使用Column Filter过滤时请勿加入过多沉淀，以免堵住过滤器。
3. 提取的质粒DNA大于10 kb时，应增加菌体收集量。
4. 洗脱质粒前应使乙醇完全挥发，避免残留的乙醇影响下游实验。
5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
本产品仅供科研用途，不用于临床诊断！
附操作流程简图
（产品包装升级中，以实物为准。）
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